實驗樣品:小鼠皮膚組織;由于小鼠皮膚組織中包含多種免疫細胞,多數(shù)據(jù)表明駐留在皮膚中的免疫細胞具有免疫監(jiān)視的功能,因此此次實驗展開對小鼠皮膚組織的實驗研究分析。
實驗目的:本次實驗是小鼠背部和尾巴上的皮膚,利用單細胞懸液制備儀消化后得到單細胞混懸液,用于后期做流式細胞分析
實驗前處理設備:單細胞懸液制備儀 JX-CKSM-4WK
小鼠皮膚組織前處理的實驗研磨操作過程:
1.準備單細胞懸液制備儀JX-CKSM-4KW一臺,配套試劑及耗材12份?! ?/p>
2.用冷水解凍消化酶和終止液?! ?/p>
3.試劑解凍后,準備好試驗樣品。選取小鼠背部皮膚和尾部皮膚各100mg,用手術剪剪成糊狀,加入裝滿消化酶的樣品管內(nèi)。
4.打開儀器電源,將樣品管放入單細胞懸液制備儀的管架上,選中管架加熱,點擊啟動,管架加熱3-5分鐘?! ?/p>
5. 管架加熱結束后,將樣品管放到模塊上,選擇程序4,選中模塊加熱,點擊啟動?! ?/p>
6.儀器運行結束后,自動停止,用40um濾網(wǎng)過濾,加入終止液終止消化(消化液:終止液1:2)
7.放到冷凍離心機上離心,離心后棄掉上清,加一定量終止液進行重懸,重懸后的混懸液就是我們需要的單細胞混懸液。
實驗操作注意事項:
1、為了保證實驗效果,整個實驗過程,樣品操作都在冰上進行。
2、配套試劑盒需要-20℃保存,使用前用冷水解凍,解凍后放在冰上。使用結束后繼續(xù)放到-20℃保存。
小鼠皮膚組織前處理的實驗研磨結果:
單細胞制備儀對小鼠皮膚組織樣品的前處理實驗效果對比圖由上圖可看出,樣品的前處理實驗結果滿足了樣品實驗需求,便于后續(xù)的樣品實驗研究分析。流式細胞分析都需要制備單細胞懸液。實體組織樣品和腫瘤在分析前需要處理成單細胞懸液。無論在何種情況之下,好的細胞得率和細胞活率對后續(xù)實驗都是至關重要的。
單細胞懸液制備儀是一款具備集成金屬浴消化與溫和剪切組織的新一代細胞懸液制備設備,可用于流式細胞術、原代細胞培養(yǎng)、單細胞測序等實驗,具有起始量小,時間短,細胞得率高等特點。